福建多色荧光寿命成像

荧光寿命成像技术是如何应用在生物医学中的？随着近年来对蛋白及分子功能研究的不断深入，科研工作者除对多色成像、钙成像等功能成像的需求日渐增多之外，对荧光寿命成像的需求也逐渐增加，而荧光寿命成像能提供除荧光强度、荧光光谱信息之外的荧光分子的寿命信息，可用于分子间相互作用（FRET）、分子所处微环境的离子浓度（如Ca2+、pH）及细胞代谢水平的改变等测量，并可拆分光谱重叠的荧光染料及染料和自发荧光，还可以结合荧光相关光谱对单分子实现荧光寿命相关光谱FLCS的测量。荧光寿命成像扩展了传统荧光成像的维度，是功能成像的理想工具，在生物医学领域有广阔的应用前景。市场上荧光寿命的测量方式可分为时域法和频域法。福建多色荧光寿命成像

荧光寿命显微成像技术（FLIM）具有对生物大分子结构、动力学信息和分子环境等进行高分辨高精度测量的能力，因此其重要性日渐提升，被普遍地应用于生物学研究及临床诊断等领域。荧光寿命成像的发展很好地弥补了基于强度成像的问题，对生物医学检测有着重要的意义。荧光的特性包含有：荧光激发和发射光谱、荧光强度、量子效率、荧光寿命等,其中，荧光寿命是指荧光分子在激发态上存在的平均时间（纳秒量级）。分子的荧光寿命在几纳秒至几百纳秒之间，因此，测量荧光寿命需要极快响应时间的探测器。福建多色荧光寿命成像荧光寿命成像可以提供荧光强度（光子数）和光子寿命的空间分布。

荧光寿命成像显微术是一种利用荧光染料固有特性的成像技术。除了具有特有的发射光谱外，每个荧光分子还有特有的寿命，它反映了荧光基团在发射光子之前处于激发态的时间。除了标准的荧光强度测量外，寿命分析还可以提供其他信息。提高质量，荧光寿命成像提供了额外的信息，有助提高共聚焦成像的质量。 它非常适合用于区分荧光发射光谱重叠的荧光探针，或消除不需要的背景荧光信号。功能成像，FLIM 是一种用于测量和量化成像数据的重要应用。 由于寿命信息与荧光基团浓度无关，因此它非常适合用于功能成像。功能成像超越了传统的分子样本位置和浓度记录，通过该技术可以进一步研究分子功能、相互作用及其环境。

荧光寿命是荧光团在发射荧光光子返回基态之前保持其激发态的平均时间长度。这取决于荧光团的分子组成和纳米环境。荧光寿命成像将寿命测量与成像相结合：对每个图像像素以测得的荧光寿命进行颜色编码，产生额外的图像反差。因此，荧光寿命成像可以提供关于荧光分子空间分布的信息和有关其生化状态或纳米环境的信息。有很多技术可以在显微镜环境中检测荧光寿命。常见的的是基于供体（受体光漂白，FRET AB）或受体（敏化发射，FRET SE）荧光强度的技术。荧光寿命是微环境的相对参数，不受环境吸收、样本浓度等因素影响。

荧光寿命成像是一种新型的荧光成像技术，它能够对不同种类或处于不同状态的生物组织提供更好的对比度，并反映荧光团及其所处微环境参数的定量分布。荧光寿命成像一般不受诸如激光或荧光强度扰动、荧光染料分布不均匀、染料的光漂白以及其他有碍荧光强度的因素的影响,是荧光光谱分析法的有效补充。超快激光技术，高速、高灵敏度探测技术，以及图像处理技术的发展，都促进了FLIM 技术的发展．尤其是将荧光寿命成像和共焦显微技术以及多光子激发荧光显微技术结合，进一步拓宽了FLIM在生物学领域的应用范围。荧光寿命成像具有其它荧光显微镜所具有的高灵敏度、可检测人体生物样品等优点。福建多色荧光寿命成像

为什么说荧光寿命成像FLIM相比于荧光强度成像更有优势？福建多色荧光寿命成像

荧光寿命成像有什么作用？荧光寿命可以在频域或者时间域测量。时间域测量方法涉及用短光脉冲照射样品（比色皿、细胞或组织），然后随时间测量发射强度。FLT由衰减曲线的斜率确定。有几种荧光检测方法可用于寿命测量，其中时间相关单光子计数（TCSPC）可实现简单的数据收集和增强的定量光子计数。频域方法涉及高频率入射光的正弦调制。在该方法中，发射发生在与入射光相同的频率处，并且随着激发光兼有相位延迟和振幅的变化（解调）。寿命测量不需要波长比率探针来提供众多分析物的定量测定。寿命法通过使用光谱位移探针扩展了分析物浓度范围的灵敏度。福建多色荧光寿命成像

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