市场上荧光寿命的测量方式可分为时域法和频域法,两者在本质上是相通的,测量精度相近,频域技术是时域法的傅里叶变换的延伸。时域和频域技术在各种显微寿命成像平台中都有应用,时间相关单光子计数方法(TCSPC )是常见的时域技术,而新兴的数字频域技术(FastFLIM™ )则取代了传统的模拟频域技术,凭借其独恃的优势成为应用广的频域技术。荧光寿命成像主要通过TCSPC技术(Time-Correlated Single Photon Counting)实现。由于TCSPC系统,一个激光脉冲只采集一个光子信号,所以激光器的重复频率决定了系统的数据采集速度。重频越高,采集速度越快,数据信噪比越好。荧光寿命成像扩展了传统荧光成像的维度,是功能成像的理想工具;上海多色荧光寿命成像哪家便宜
荧光寿命成像是什么?如果分子环境刺激激发态衰变而不发射光子,则荧光强度会降低(淬灭)。荧光淬灭是一条单独的发射路径,因此在动力学上与荧光过程形成竞争关系。激发态存储现在可以通过一个以上的过程衰变,从而缩短荧光寿命。这种寿命的改变可用于收集分子环境的信息。一种特殊类型的淬灭是将激发能量以非辐射的方式传递到相邻的不同荧光染料中:“荧光共振能量转移”,FRET。此时,不只第1个荧光染料(供体)变暗,寿命变短,而且第二个荧光染料(受体)在“错误的”激发颜色下开始发光。由于这种效果的产生需要两种荧光染料(小于10 nm)的密切接触,因此将其用作研究分子相互作用的“分子标尺”。它也是许多现代FRET生物传感器的基础。上海多色荧光寿命成像哪家便宜利用荧光寿命成像显微镜技术可实现可以实时监控发光纳米颗粒在活细胞内的稳定性。
荧光寿命(FLT)是荧光团在发射光子并返回基态之前花费在激发态的时间。根据荧光基团的不同,FLT可以从皮秒到数百纳秒不等。荧光团群的寿命是指经荧光或非辐射过程的能量损失后,激发态分子数量以指数方式衰减到原始数量的N / e(36.8%)的时间。荧光寿命是荧光团的固有属性。FLT不依赖于荧光团浓度、样品吸收、样品厚度、测量方法、荧光强度、光漂白和/或激发强度。它受外部因素影响,如温度、极性和荧光淬灭剂的存在。荧光寿命对依赖于荧光团结构的内部因素敏感。
荧光寿命成像开始用于组织体的在体成像,与传统的使用荧光强度和光谱信息作为鉴别组织异常的成像方式相比,寿命成像提供了更多的生化诊断信息。荧光寿命成像已用于骨骼和牙齿的诊断。另外,采用多光子激发可显著提高组织体的成像深度,如对人体皮肤自体荧光进行多光子激发荧光寿命成像,成像深度达200 um,组织体的荧光寿命分布揭示了细胞代谢状态的变化,可用于对皮肤病的诊断。对腔体中瘤的早期临床诊断,已开发出具有实时及寿命分辨功能的内窥镜,并对离体膀胱样品进行测试,得到了黄素分子的自体荧光寿命图像。荧光寿命成像基于荧光团的荧光寿命取决于其分子环境而并非浓度的事实。
荧光寿命成像技术实时监控纳米颗粒在细胞内的稳定性:利用荧光寿命成像显微镜技术可实现可以实时监控发光纳米颗粒在活细胞内的稳定性。荧光寿命成像不但具有其它荧光显微镜所具有的高灵敏度、可检测人体生物样品等优点,它在监控荧光纳米材料的稳定性上还具有以下几个优势:(1)荧光寿命不受荧光探针的浓度的影响,可排除纳米材料的胞吐及细胞分化导致的纳米颗粒的稀释等对测量的影响;(2)很多常见的发光材料的荧光寿命都远远大于细胞的自荧光的寿命,很易去除生物自荧光对荧光成像的干扰;(3)发光材料的荧光寿命和其材料的稳定性密切相关,荧光寿命的改变可以灵敏地反映相应材料的化学稳定性。荧光寿命成像有潜力应用于瘤识别,病变诊断等领域。上海多色荧光寿命成像哪家便宜
荧光寿命成像这种技术相对较新,涉及到同时在图像的每个像素处确定荧光衰减时间的空间分布。上海多色荧光寿命成像哪家便宜
影响荧光寿命成像测量的因素有哪些?散射光的影响: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影响较大。校正办法:先用短的激发光激发,检出溶液的拉曼峰,然后进行荧光光谱校正。因为荧光光谱不随激发光波长的改变而改变,而拉曼光却随之改变。高浓度样品的影响:1)当激发光照射高浓度样品时,在激发光入口附近产生荧光,但这些荧光并不能进入荧光检测器。2)高浓度的分子之间相互作用而发生活性阻碍现象。3)荧光的再吸收:即荧光光谱的短波长端和激发光谱的长波长端如果相互重叠,则发生荧光再吸收。上海多色荧光寿命成像哪家便宜
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