扫描电子显微镜类型多样,不同类型的扫描电子显微镜存在性能上的差异。根据电子器种类可分为三种:场发射电子器、钨丝器和六硼化镧 。其中,场发射扫描电子显微镜根据光源性能可分为冷场发射扫描电子显微镜和热场发射扫描电子显微镜。冷场发射扫描电子显微镜对真空条件要求高,束流不稳定,发射体使用寿命短,需要定时对针尖进行清洗,*局限于单一的图像观察,应用范围有限;而热场发射扫描电子显微镜不*连续工作时间长,还能与多种附件搭配实现综合分析。在地质领域中,我们不*需要对样品进行初步形貌观察,还需要结合分析仪对样品的其它性质进行分析,所以热场发射扫描电子显微镜的应用更为普遍。英瀚斯专业承接扫描电镜检测。山西整体扫描电镜检测
扫描电镜实验方法原理1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能较为大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水,也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。 2. 目前采用较为多、效果较为好的方法是临界点干燥法。其原理是在一装有溶液的密闭容器中,随着温度的升高,蒸发速率加快,气相密度增加。液相密度下降。当温度增调到某一定值时,气、液二相密度相等,界面消失,表面张力也就不存在了。此时的温度及压力即称为临界点。将生物样品用临界点较低的物质置换出内部的脱水剂进行干燥,可以完全消除表面张力对样品结构的破坏。 目前用得较为多的置换剂是二氧化碳。由于二氧化碳与乙醇的互溶性不好,因此样品经乙醇分级脱水后还需用与这两种物质都能互溶的「媒介液」醋酸戊脂置换乙醇。山西整体扫描电镜检测英瀚扫描电镜可用于观察动物:大肠、绒毛、细胞、纤维等。
扫描电镜样本临界点干燥法 临界点干燥法是利用物质在临界状态时,其表面张力等于零的特性,使样品的液体完全汽化,并以气体方式排掉,来达到完全干燥的目的。这样就可以避免表面张力的影响,较好地保存样品的微细结构。此法操作较为方便,所用的时间也不算长,一般约2~3小时即可完成,所以是较为为常用的干燥方法。但用此法, 需要特殊仪器设备。临界点干燥是在临界点干燥仪中进行的,操作步骤如下: a.固定、脱水:按常规方法进行。如样品是用乙醇脱水的,在脱水至100%后,要用纯acetone置换15~20分钟。 b.转入中间液:由纯acetone转入中间液醋酸异戊酯中,时间约15~30分钟。 c.移至样品室:将样品从醋酸异戊酯中取出,放入样品盒,然后移至临界点干燥仪的样品室内,盖上盖并拧紧以防漏气。 d.用液体二氧化碳置换醋酸异戊酯:在达到临界状态(31℃, 72.8大气压)后,将温度再升高10℃,使液体二氧化碳气化,然后打开放气阀门,逐渐排出气体,样品即完全干燥。
生物样品扫描电镜常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的,不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击;具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多,质地柔软,机械强度小;组成元素的原子序数低,导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量地保存材料的固有形态,又要改良其物理性能,使其适合在电镜下观察成像。 电镜是进行材料表征时用到一种重要工具,帮助观察材料的微观形貌。然而,在观察软/湿生物材料时(离体组织,带细胞材料等),涉及到观察样品的固定、脱水、干燥、金属溅射等步骤,处理复杂,耗时较长。英瀚斯专业扫描电镜仪器使用平台!
扫描电子显微镜中样本必须在真空中观察,因此无法观察活样本。在处理样本时可能会产生样本本来没有的结构,这加剧了此后分析图像的难度。由于透射电子显微镜只能观察非常薄的样本,而有可能物质表面的结构与物质内部的结构不同。此外电子束可能通过碰撞和加热破坏样本。还有,电子显微镜观察到的样本都是没有颜色的。 现在的比较新技术可以在电子显微镜中观察湿的样本和不涂导电层的样本(环境扫描电子显微镜,Environmental Scanning Electron Microscopes,ESEM)。假如事先对样本的情况比较清晰的话则可以基本上进行不破坏的观察。扫描电子显微镜由三大部分组成:真空系统,电子束系统以及成像系统。山西整体扫描电镜检测
扫描电子显微镜具有辩率高、景深大、成像立体感强的特点。山西整体扫描电镜检测
扫描电镜操作基本步骤 1 、取材 扫描电镜下观察的样品尺寸要求比较宽松,一般1cm3左右样品都能适合大多数扫描电镜观察。 2 、固定 铺片培养的细胞取出浸入 PBS 中,漂洗细胞表面。然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 预冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或过夜,吸出固定剂,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 预冷的 1% 锇酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脱水 acetone / 醋酸异戊酯( 1 : 1 )脱水 10min ,接下来醋酸异戊酯脱水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脱水,每种浓度酒精通过 2 次,每次 15min 。 山西整体扫描电镜检测
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