培养实例2和对比培养例2的培养结果比较:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养28d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,在平均株高、莲座叶大小、根长、花朵数量等方面均优于1/2ms生长培养基;并且,采用上述培养方法,不论是1/2cs生长培养基还是1/2ms生长培养基,均能获得形态完整的花粉,且花粉活力高达%,其特点在于选择了兰兹贝格型拟南芥作为培养对象,且选择了高度适中的培养盒进行培养,克服了传统培养方法无法获得拟南芥整个生育期无菌苗的缺点,所获无菌花***可直接用于花*离体培养等研究内容。如图2所示。培养实例3:油菜无菌苗培养与培养实例1不同的地方在于:步骤(1)所用种子为中双11号油菜种子,其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为:中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养9d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,叶色浓绿,茎秆粗壮、平均茎中粗为,根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。对比培养例3:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例3,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。无酚红培养基确保了实验结果的高度准确性。西藏减血清培养基大概价格多少
体外动物细胞培养时需要大量谷氨酰胺,利用量常超过其他必须氨基酸利用量的总和。维生素是维持细胞生长的生物活性物质,在细胞代谢中起调节及控制作用。维生素可分为水溶性和脂溶性两类,水溶性维生素主要包括泛酸、维生素B12、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黄素、维生素C、胆碱、肌醇等;脂溶性维生素主要包括维生素A、D、E、K等;有的培养液中还直接采用ATP和辅酶A;大部分培养基中还有生物素。许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。比如,泛酸可以在细胞内转变成酰基载体蛋白和辅酶(如辅酶A),参与糖类、脂类和蛋白质代谢中的催化反应;维生素B12则在细胞内参与叶酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的细胞培养基中维生素的浓度有较大差异。例如,DMEM培养基中维生素的含量约为MEM培养基的两倍,其原因是一方面不同种类维生素的作用不同,另一方面不同种类的细胞对维生素的需求也可能有较大差异,相应细胞培养基的配方中维生素的含量也可能不同。无机盐是细胞维持生命活动所不可缺少的营养成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43—、SO42—、HCO3-等,主要作用为维持细胞培养液渗透压平衡。西藏减血清培养基大概价格多少减血清培养基减少了血清对细胞的影响。
1.细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份,参与细胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液,前者缓冲能力较弱,适合于密闭培养;后者缓冲能力较强,适合于5%CO2的培养条件。表1-1几种常用的BSS配方(g/L)天然培养基指来自动物体液或利用**分离提取的一类培养基,如血浆、血清、***、鸡胚浸出液等。其***是营养成分丰富,培养效果良好,但缺点是成分复杂,来源受限且制作过程复杂、批间差异大。目前***使用的天然培养基是血清,另外各种**提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。
一般情况下应调pH比所需值低~,因过滤**后,pH值会升高约。8)在细胞培养过程中,建议不加或加少量的***,如血清的浓度较低则所加***的量也要相应降低一些。9)建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH,因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。如下图所示:图6-1MEM培养基(SLM,MD611)在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压图6-2199培养基(MD502)在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压培养基**培养基的**方法主要有两种,高压**及um微孔滤膜过滤**。与过滤相比,高压**的工作强度小,相对便宜,失败率低,但易造成营养成分的流失。高压**某些培养基(如MEM)可进行高压**,例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,可在高压**后加入。另外可高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。为保证高压**的效果,**设备的验证很关键,可高压**的培养基在121℃、15psi,15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失,因此不需将**时间延长。过滤**大多数培养基采用~μm孔径的微孔滤膜进行过滤**,并且已成为培养基**的发展方向。无酚红培养基确保了实验结果的准确性。
**早开发的基础培养基(minimalessentialmedium,MEM),其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍,其特性及应用的范围见表1-2。表1-2常用合成培养基的特性及应用的范围培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后,可***用于多种细胞培养,并用于**学、*苗生产等。MEM细胞培养基MEM(MinimalEssentialMedium)培养基有含Earle's平衡盐的类型,也有含Hanks'平衡盐的类型;有高压**型的,也有过滤**型的;还有含非必需氨基酸的类型。是**基本、适用范围**广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿*细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交*的骨髓*细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基础上改良,增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交*细胞培养。F12培养基适用于神经细胞和其他敏感细胞系。西藏减血清培养基大概价格多少
减血清培养基提高了实验的可重复性。西藏减血清培养基大概价格多少
生产上一般采用冷水喷淋冷却,冷却到40-50℃后,输送到预先已经**过的罐内。(四)、间歇**与连续**的比较1、歇**的***和缺点***是设备要求低,不需另外设置加热、冷却装置;操作要求低,适于手动操作,适合于小批量生产规模;适合于含有大量固体物质的培养基的**。缺点是培养基的营养物质损失较多,**后培养基的质量下降;需进行反复的加热和冷却,能耗较高;不适合于大规模生产过程的**;发酵罐的利用率较低。2、连续**的***和缺点***是**温度高,可减少培养基中营养物质的损失;操作条件恒定,**质量稳定;易于实现管道化和自控操作;避免了复的加热和冷却,提高了热的利用率;发酵设备利用率高。缺点是对设备的要求高,需另外设置加热、冷却装置;操作较麻烦;染菌的机会较多;不适合于含大量固体物料的**;对蒸汽的要求高。由此可见,无论在理论上或者在实践上,与间歇**过程相比,连续**的***十分明显。因此,连续**越来越多地被用培养基的**。西藏减血清培养基大概价格多少