上海曼博生物医药科技有限公司始终致力于为客户提供一站式生物医药科技服务,以创新和为价值理念,通过自身研发团队,以及与国内外专业科研团队强强联合,不断创新,为生命科学和医药研发行业提供产品和服务。生物医学工程是综合应用生命科学与工程科学的原理和方法,从工程学角度在分子、细胞、组织、乃至整个人体系统多层次认识人体的结构、功能和其他生命现象,研究用于防病、治病、人体功能辅助及卫生保健的人工材料、制品、装置和系统技术的总称。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!用PEI转染时,一般和DNA的比例是?陕西高效率PEI转染试剂试用装
接种细胞:转染前,用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,总体积如表1所示,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。孵育细胞和分析结果:在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。请自行确定检测时间。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!近期还可申请PEI转染试剂试用装!陕西高效率PEI转染试剂试用装用PEI转染试剂时,一般和DNA的比例是多少呢?
材料:质粒DNA指数生长的真核细胞PEI(聚乙烯亚胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI储存液(100μM):称取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm滤膜过滤,储存于4℃备用。1×HBS(pH7.4):将8.76gNaCl溶解于900ml超纯水,加入20ml1M的HEPES,调pH值到7.4,定容至1L,过滤(0.2μm滤膜)后储存于4℃备用。方法:1.细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!
对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1.5~4μL体积线性PEIMAX转染试剂进行优化。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!Polysciences PEI转染试剂中国代理商是哪个?
PEIMAX粉末配置方法:1)将1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃烧杯中;2)放入搅拌转子,放置于磁力搅拌器上,设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分钟左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氢氧化钠滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超过7.1,则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1;6)将溶液转移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液;8)按需分装,4°C储存(切记不可冷冻);注:未经配制的粉末有效期为2年。配置成液体后分装在合适的瓶子中,并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!Polysciences PEI转染试剂和Pulyplus PEI转染试剂哪个好?陕西高效率PEI转染试剂试用装
PEI转染试剂和其他转染试剂相比有什么优势?陕西高效率PEI转染试剂试用装
上海曼博生物医药科技有限公司成立于2019年,依托于集团公司泉心泉意深厚的资源和超过400家国内客户群体,生命科学领域一站式供应链体系,以及高风险生物危险材料进出口平台的优势,曼博生物严格筛选国际创新且经过同行验证过的产品和技术,引入中国市场,开发、孵育和推广,致力于将全球创新产品和前沿技术带入中国,集中在为细胞/基因领域、/免疫,抗体药物研发客户提供小众创新产品,包括从Researchgrade到cGMP等级的无动物源培养基质,转染试剂、病毒转导试剂、基因编辑工具等产品和定制服务,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)药物研发从R&D到Clinicaltrial以及后期商业化的无缝转化。更多关于Polysciences PEI相关产品问题,欢迎咨询上海曼博生物!也欢迎关注我们的公众号:Mine-Bio。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!陕西高效率PEI转染试剂试用装