超滤是大分子脱盐、浓缩较方便的方法,重复性好,得率有保障,已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作;在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法。超滤管采用离心方式快速处理样品,是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是,在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前,我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得较佳体验,更重要的是,宝贵的样本会遭受本可避免的损失!如果目的蛋白是120kDa,请问应该选择的超滤管规格是100k,50k,还是30k甚至10k?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法?这些没有统一的说法,是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。超滤离心管是一种经济、有效且环保的分离技术,具有普遍应用前景。绍兴小型超滤离心管厂家电话
以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用设备头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml。离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。绍兴小型超滤离心管厂家电话超滤离心管通常被用于生物医学、制药、食品科学等领域中。
可以通过多个超滤管同时超滤来降低浓度,而后者通过改变不同的缓冲液直到没有蛋白质沉淀。用来浓缩蛋白质的。如果要更换缓冲液,当总蛋白溶液浓缩到1毫升左右时,轻轻添加一个新的缓冲液〈用0.22um超滤膜超滤后〉,然后连续浓缩到1毫升左右。浓缩液的之后体积取决于所需的蛋白质浓度,通常不超过500 ul,但也要浓缩到200 ul以下。根据每次至少10次的体积浓度计算,1000次以上的3次基本可以达到更换缓冲器的目的。提取之后浓缩蛋白的操作在冰上进行。黄色设备头(200ul)用于提取之后的蛋白质浓缩物。设备头沿设备头边缘轻轻插入。将蛋白溶液轻轻吹匀。注意不要触摸超滤膜。吸取浓缩液,一次较多吸200 ul,直至耗尽。之后留在管底的浓缩液不需要吸收,否则太困难,可能损坏超滤膜。之后,在无超滤膜的超滤管中加入milliq水,以防止超滤膜干燥。
超滤作为一种膜分离技术,普遍应用于生物样品的浓缩、脱盐和缓冲液置换,其原理是样本在力的作用下,通过超滤膜孔径的筛滤,大分子量的颗粒被截留下来,而水、溶剂和低分子量溶质则允许透过膜,从而达到浓缩、脱盐和缓冲液置换的目的,这种方法较大的特点是操作简便、快速、高效,可同时浓缩和纯化分子,一般来说超滤的回收率能够达到90%以上,因此得到许多人的青睐。一种超滤离心管,包括主管,主管为顶部开口底部封闭结构,主管开口处安装有顶盖,主管内安装有内管,内管上下贯通,内管底面贴合有超滤膜,超滤膜将内管底面包覆,超滤膜底面贴合有支撑板,超滤膜位于内管底面与支撑板之间,内管底部安装有底托,内管配合底托将超滤膜、支撑板压紧,内管、超滤膜、支撑板、底托与主管中位于底托以下的容腔空间连通。超滤离心管是一个快速、便捷的方法来从混合物中分离和提取大分子,如蛋白质、核酸等。
选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。超滤离心管通常需要在低温条件下进行操作,以避免目标分子被破坏或失活。绍兴小型超滤离心管厂家电话
使用超滤离心管时应注意避免过度旋转造成机械损伤或故障,并及时维护保养设备。绍兴小型超滤离心管厂家电话
超滤离心管的常见问题与解答,一:超滤离心管的膜材质是什么?超滤离心管的膜材质为特有的Ultracel再生纤维素膜,生产工艺严格,截留分子量明确而,蛋白吸附损失较小。二:如果要用超滤离心管的方法分离两种蛋白,那么这两个蛋白的大小需要相差多少?按照经验,建议两个蛋白的分子量要相差一个数量级(10倍)。不保证超滤离心管不包含RNA酶,建议用0.1%DEPC在37度浸泡2小时,以完全灭活RNA酶;残留的DEPC可以用Milli-Q超纯水洗涤除去。去污剂因其独特的性质,当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration、CMC)时,去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象,这有可能会影响去污剂的去除效果,具体的操作步骤请垂询我们。绍兴小型超滤离心管厂家电话