贵州培养基制备器安装调试

三角培养瓶是细胞培养中的常用耗材，也可用于培养基的配制、混合及储存。利用三角培养瓶制备培养基可以按照以下步骤操作：配料：配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。溶解：淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。调PH：用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。过滤：滤纸或棉花进行过滤。分装：一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角培养瓶：若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角培养瓶，很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。试管分装：液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度；固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。一般培养基用0.IMPa(121℃)维持15~30min即可彻底灭菌。贵州培养基制备器安装调试

培养基的制备：（1）称量：根据培养基的配方,称取适量药品于搪瓷杯中;（2）溶解：用量筒量取所需水量,置电炉上加热,一边搅拌,至完全溶解,加热至沸腾,拔掉电源,待冷却;（3）分装：根据不同需要,立即趁热分装入三角瓶或试管中,分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜,分装试管一般为管长的1/5（需根据试管的大小而定）.液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基约分装10毫升左右.（4）塞硅胶塞：装好培养基的试管应塞上硅胶塞,松紧合适,紧贴管壁,不留缝隙,约1/2塞入内,这样即可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发.（5）包装：三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎,试管集中于试管篓.2、无菌水的制备：（1）用10ml移液管量取9.2ml蒸馏水（稀释水）装入试管中.（2）用100ml量筒量取95ml蒸馏水（稀释水）装入150ml的三角瓶中.可置少许玻璃珠于三角瓶内,防止暴沸.（3）量取240ml蒸馏水（稀释水）于250ml的三角瓶中,塞上瓶塞用牛皮纸包扎好,高压灭菌备用。贵州培养基制备器安装调试一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。

培养基制备程序：全自动培养基制备器可以快速的准备好灭菌，放入灭菌锅，“水套系统”里加入夹层水（灭菌锅与灭菌锅腔体之间的夹套水用于有效的热传导），加入培养基原料，准备启动灭菌程序。培养基可以直接在培养基制备器内悬浮溶解。强力磁力搅拌培养基在内腔里混合的均匀性得到确保，并避免凝结。培养基还可以选择使用水浴模式预先溶解。没有经过专门培训的人员由于直观的图形化界面也能够简单的进行操作。用户对于多达50个灭菌参数可以自定义设置，它们可以被储存起来并随时调用。

培养基制备的基本方法和注意事项：1、培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸2、培养基pH的初步调正因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培养基各成分完全溶解后，应进行PH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有明显的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的好终PH，保证培养基的质量。PH调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。3、培养基的过滤澄清液体培养基必须较全澄清，琼脂培养基也应透明无明显沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。培养基中营养物质的浓度过大，会使渗透压过高，使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。

实验室在制作培养基时候的经验总结：培养基分装：培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时较好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基较终pH之用。选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。贵州培养基制备器安装调试

平板培养基要除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。贵州培养基制备器安装调试

制备培养基的操作要点：用过的玻璃器皿：凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。贵州培养基制备器安装调试

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