培养基的灭菌:一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。某些畏热成分,如糖类,应另行配成20%或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和物品等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固。培养基制备器试管塞不要塞得太紧(使用硅胶塞的时候),勿使用橡皮塞。四川培养基制备器厂家
基础培养基各种微生物的营养要求虽不相同,但多数微生物需要的基本营养物质相同。按一般微生物生长繁殖所需要的基本营养物质配制的培养基即成为基础培养基。牛肉膏蛋白胨培养基就是很常用的基础培养基,它可作为一些特殊培养基的基本成分,再根据某种微生物的特殊要求,在基础培养基中添加所需营养物质。根据培养基的特殊用途可分为基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基等。基础培养基:含有细菌生长繁殖所需的基本营养物质,可供大多数细菌生长。在牛肉浸液中加入适量的蛋白胨、氯化钠、磷酸盐,调节pH7.2~7.6,经灭菌处理后,即为基础液体培养基;如再加入0.3%~0.5%的琼脂,则为基础半固体培养基;加入1%~2%的琼脂,则为基础固体培养基。牛肉膏蛋白胨培养基就是很常用的基础培养基,它可作为一些特殊培养基的基本成分,再根据某种微生物的特殊要求,在基础培养基中添加所需营养物质。四川培养基制备器厂家半组合培养基指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。
灭菌:分装好的培养基应立即进行灭菌。灭菌的方法种类如下:1.高压蒸汽灭菌法:大多数热培养基都可用此法,小量分装时,用121℃、15min;灭菌量大时,用121℃、30min灭菌;含糖类的培养基只能113℃~115℃、15min灭菌,避免糖类遭破坏。2.煮沸灭菌:对含有不耐高温物质的培养基,可使用此方法。3.过滤除菌:以过滤的方法除菌,用无菌操作技术,定量加入培养基。血液、物品可用无菌操作技术抽取,加入冷却到50℃左右的培养基中。培养基含有不耐热的物质时,可用此法。
培养基的质量测试:每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其较终pH.将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去。用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基,培养24~48小时,如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用。培养基的保存:培养基应存放于冷暗处,较好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。紫外线作用于核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧,从而起共同杀菌作用。
培养基的分装:大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后,均要对分配器的管道系统进行冲洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管。固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。平皿:倾注平皿,应在无菌室中放置3—4h,如用塑料平皿须在35℃培养箱中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。斜面:制备低层斜面分装于试管,约占容积1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染。全自动培养基制备仪主要特点:具有快速升温和迅速冷却功能。四川培养基制备器厂家
培养基制备器完全灭菌后用于单种微生物培养和鉴定,一般都是在无菌状态下储存,定量使用的。四川培养基制备器厂家
如何避免沉淀物的产生:在使用血清的时候,注意下列的操作:①解冻血清时,请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。②解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。③勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。④血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。⑤若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。四川培养基制备器厂家