胰酶消化细胞的原理胰酶消化细胞是一种用来分解细胞质和细胞间物质的化学过程它可以被看成一种简单的动力学过程,它将细胞结合部分的物质分解为其他物质,然后这些留下的物质可以用来维持细胞的高能量水平这种过程通过将脂肪、蛋白质、糖类和其它物质分解为小的离子或者原子小分子的方式来发生。胰酶是细胞分解与吸收物质的一种关键分子,通常有四种类型,它们是肽酶,脂水解酶,载脂蛋白酶和糖水解酶,分别可以将蛋白质、脂肪、脂蛋白和糖类物质分解为更小的离子和分子,以便细胞可以更好地吸收物质,维持其自身的正常功能和形态。EDTA是一种化学螯合剂,主要作用在于能螯合Ca、Mg离子,使细胞分离。北京重组胰酶生产企业
胰蛋白酶是一种肽链内切酶,属于丝氨酸蛋白酶家族,不仅可以水解碱性氨基酸(精氨酸或赖氨酸)羧基端的肽键,还可以水解由碱性氨基酸的羧基形成的酰胺键或酯键。胰蛋白酶可以从牛、猪等哺乳动物的胰脏提取,经过纯化后获得结晶,再制成冻干制剂。牛的胰蛋白酶有223个氨基酸,分子量为23800道尔顿,活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水,不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有机溶剂。胰蛋白酶的等电点pH值为10.1,**适pH值范围在7.8~8.5左右,pH值大于9.0时不可逆失活。钙离子对胰蛋白酶的酶活具有保护和***作用。[1]北京重组胰酶生产企业胰酶用0.05%还是0.25%的?需不需要含酚红的?
胰酶分装冻存时要注意什么?胰酶分装时尽量分装成多瓶,并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时体积会膨胀,多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判断胰酶消化完全?注意:不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才表示消化好了。一般肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙状移动就可以了,就应该停止消化。6、胰酶适用于哪些细胞消化?它的消化效果与哪些有关呢?胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞,如胚胎、上皮、肝、肾等组织,但对纤维性组织和较硬的*组织效果较差。胰酶的消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。
0.25%胰酶是细胞生物学中常用的一种生物试剂,下面汇总一下胰酶使用过程中常见的一些问题。
胰酶的使用浓度是多少?胰酶浓度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。
胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长,胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存,在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在4℃长期保存。胰酶使用的时候要注意什么?(1)在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。(2)胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。 消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。
只断裂赖氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***过程的羧基参胰蛋白酶降解物分析与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**适pH值~。pH>。Ca2+对酶活性有稳定作用;重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**剂对其活性有强烈**。临床用于抗消肿,工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。胰蛋白酶*典标准胰蛋白酶来源含量本品系自猪、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品计算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。胰蛋白酶制法要求本品应从检*合格的牛、羊或猪胰中提取,生产过程应符合现行版《*品生产质量管理规范》的要求。胰蛋白酶性状本品为白色或类白色结晶性粉末。胰蛋白酶鉴别取本品约2mg,置白色点滴板上,加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液,即显紫色。胰蛋白酶检查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法测定(2010年版*典二部附录ⅥH),pH值应为~。溶液的澄清度取本品,加,依法检查(2010年版*典二部附录ⅨB),溶液应澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制备取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取,混合,pH值为)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀。淡黄色的胰酶溶液能放心使用吗?北京重组胰酶生产企业
变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离,请放心使用。北京重组胰酶生产企业
(含)英文名:(含)储存条件:-20℃产品简介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其**适温度约为37℃。胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()由、除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下1min左右就可以消化大多数贴壁细胞。使用说明(*供参考):1.贴壁细胞的消化①吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,去除残余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液(),略盖过细胞即可,室温放置。(不同的细胞消化时间有所不同)③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。④如果发现消化不足,则加入胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()重新消化。⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落。 北京重组胰酶生产企业