图1为两轮多重PCR的二代测序建库过程。图2为10个样本100SNPs平均覆盖深度。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例*用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。实施例1.基因组DN**段化a.打开Qsonica超声破碎仪，提前让循环水浴降温，工作温度为4℃。b.转移总量为1ug的基因组DNA到，用NucleaseFreeWater(以下称NFW)补足到100uL，震荡混匀，短时离心。c.将，旋紧中轴，插入顶盖，闭合机器，设定打断程序：振幅-25％，on&off为20s-30秒，时长15分钟。开始打断。d.打断结束后，取出，按照顺序排列整齐，开盖。实施例，先配置去除DNA之外的试剂，按照理论值的125％配，震荡混匀，短时离心，分装到96孔板中，每孔加7uL，之后从前面，盖上盖子。震荡混匀，短时离心。。设定程序：25℃30分钟、72℃15分钟、4℃保持。c.结束后，每孔中加入Ligase(单***)和1uL的Adapter，盖上新的盖子。震荡混匀，短时离心。室温下孵育20-30分钟。d.磁珠震荡30秒，充分混匀后，每一孔中加入25uL的磁珠，盖上新盖子。震荡混匀，短时离心。室温下孵育5分钟。e.将96孔板或八联管放上磁力架，等待2分钟，溶液澄清后。迈杰中心实验室设有SLAN 96P、Rotor-Gene Q、ABI 7500、ABI ViiA7、Roche z480等实时荧光定量PCR仪及数字PCR仪！湖北标准迈杰转化医学NGS平台来电咨询
pcrpurificationkit为德国qiagen公司的产品，产品目录号为y5-28006。。qubittmdsdnahsassaykit为thermofisher公司的产品，货号为q32854。truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit为illumina公司的产品，产品目录号为fc-121-3003。kapalibraryquantificationkit为kapa公司的产品，产品目录号为kk4824。miseqreagentkitv3-600cycles测序试剂为illumina公司的产品，货号为ms-102-3003。miseqfgx二代测序仪为illumina公司的产品。实施例1、基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒的制备一、68个基因座的筛选本发明的发明人通过查阅文献和现有二代测序str分型产品获得大量候选的y-str基因座，然后根据中国人群str群体遗传多态性分析结果，**终筛选获得68个基因座，包括67个y-str基因座和1个性别决定amelogenin基因座。湖北标准迈杰转化医学NGS平台来电咨询迈杰转化医学开发的伴随诊断试剂盒,基因突变检测试剂盒,检测范围全。
商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。3、LifeTechnologiesSOLID：ABI于2007年底推出SOLID系统，之后不断升级至SOLID4。SOLID测序过程中以连接反应取代聚合反应。具体测序流程为：（1）文库制备：将基因组DNA打断，在其两头加上接头，构建成文库；（2）乳液PCR／磁珠富集。此过程与454测序技术类似；（3）微珠沉积；（4）连接测序；（5）数据分析。454测序、Solexa、Solid均是边合成边测序原理，454和Solid均有乳液PCR过程。IonTorrent:2007年454技术创始人罗森伯格创办IonTorrent。LifeTechnologies于2010年收购了IonTorrent，同年推出个人化基因组测序仪PGM。2012年推出IonProton测序仪。Proton更侧重人基因组、外显子组、全转录组测序。PGM测序仪的设计是基于半导体芯片技术，在半导体芯片的微孔中固定DNA链，随后依次掺入ACGT。随着每个碱基的掺入，释放出氢离子，在它们穿过每个孔底部时能被检测到。不需要激光、照相机或标记。现有平台:Solid3,Solid4(100G),IonPGM和IonProton。
既节约时间又降低测序成本。目前，基于法庭科学领域运用**多的ngs系统为illumina公司的miseqfgxtm系统和thermofisher公司的iontorrentpgmtm系统，但针对以上平台的二代测序商业化str分型试剂盒的研发尚处于起步阶段，主要有powerseqautosystem(promega，madison，wi,usa)、forenseqtmdnasignatureprepkit(illumina，sandiego，ca，usa)和precisionidglobalfilerngsstrkit(termofisher，waltham，ma，usa)。但以上试剂盒涉及的y-str相对较少，三个试剂盒分别包含了1个y-str基因座、26个y-str基因座、2个y-str基因座。同时存在试剂盒价格昂贵，配套的数据分析软件只能针对各自开发试剂盒，参数的设置相对固定，只能对固有基因座的测序数据进行分析，不利于法医学实际应用。因此，构建一种适用于当前主流二代测序检测平台miseqfgxtm系统及开放性测序数据分析软件straitrazor、myflq等，且能容纳更多y-str基因座的复合扩增体系具有一定的意义。技术实现要素：本发明的目的是制备检测更多y-str基因座的试剂盒，提高了父系亲缘关系分析能力和鉴定效能。本发明首先保护引物组合，可包括引物1—引物120；引物1—引物120均为单链dna分子，核苷酸序列依次可如seqid**—seqid**20所示。迈杰基于基因组学、蛋白组学、细胞组学及病理组学等综合性转化医学平台，丰富的伴随诊断开发经验。
，需将磁珠固定在特制的PTP平板上。这种平板上含有许多直径约为44μm的小孔，每个小孔*能容纳一个磁珠，通过这种方法来固定每个磁珠的位置。启动测序反应后，每次向PTP平板中加入一种dNTP，如果能与待测序列配对，则会在碱基连接在模板上之后释放焦磷酸，焦磷酸通过ATP硫酸化学酶***荧光素酶产生荧光，通过PTP板另一侧的CCD照相机记录荧光，从而确定目的模板的核酸序列。ABI/SOLiDABI/SOLiD技术原理SOLiD测序技术与454技术的原理比较类似，同样是采用油包水的方式进行EmulsionPCR。不同之处在于SOLiD形成的小水滴要比454系统小得多，只有1μm大小，并且在PCR扩增的同时对扩增产物的3'端进行修饰，为下一步的测序做准备。在PCR完成之后，SOLiD技术进行测序时，其反应底物不是dNTP也不是ddNTP，而含有8个碱基的单链荧光探针混合物，在测序时，这些探针按照碱基互补规则与单链DNA模板链配对，不同的探针的5'末端分别标记不同颜色的荧光染料，每两个碱基确定一个荧光信号，相当于一次能决定两个碱基，因此，这种测序方法也被称为两碱基测序法。 MSH6抗体试剂 苏苏械备20180569号.湖北标准迈杰转化医学NGS平台来电咨询
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二代测序是一个强大的功能平台，它可以同时给数以万计的DNA分子进行测序。由于这种可以多个样本同时测序的能力，在个性化医疗、遗传疾病和临床诊断等方面，二代测序也就是高通量测序开创了**性的领域。早在1900年代就发明的Sanger测序法，成为了DNA测序的黄金法则，即便到了***它仍被***用来进行常规测序和NGS数据的验证。它利用高保真DNA聚合酶生成与单链DNA模版互补的拷贝。在每个反应中，一个可以特异性识别模版的单链引物，可以从3端开始启动DNA合成，根据碱基互补配对原则，脱氧核糖核苷酸或简单的核苷酸是一个接一个的与模版配对。NGS平台自身的软件大多是做分析及报告的，样本管理或者实验管理一般需要单独上信息化，对整体业务效率还是有明显提高的。 湖北标准迈杰转化医学NGS平台来电咨询