细胞和组织培养为什么需要使用血清?血清通常作为补充剂,以2-10%的浓度加入培养基中,为细胞提供综合营养、元素、生长和附着因子。血清还可作为细胞培养系统的缓冲液,避免各种因素(包括pH变化、蛋白水解活性或重金属、内毒等)干扰细胞生长或产生毒性作用。血清是如何加工的?血清采集后冷冻运输至加工工厂,解冻并检测细菌、病毒、内有害元素和血红蛋白含量等多项指标。选择更优良的血清在无菌环境下进行系列膜过滤无菌处理,然后在无菌环境下进行分装并快速冻存于-20°C,在所有批次验证达到或找过QC标准之前隔离存放。血清根据血红蛋白含量的不同,表现的颜色也不一样。龙港Biochannel培养基
胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是指在健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,由于血清采集时间早,其胎球蛋白较多,血清白蛋白含量高,而γ-球蛋白含量极低,并富含多种生长因子,因此,是培养细胞更为优良的牛血清。牛血清的成分复杂,主要包含蛋白质、多肽、元素、氨基酸、葡萄糖等多种营养成分。虽然其中大部分成分已为人知,但还有一部分也还不清楚,而且其组分及含量常依动物性别、年龄、生理状态、营养条件不同而有差异。血清理含有促进细胞生长的成分外,同时含有内有害元素、血色素、补体、抗体等其他有害成分,影响细胞生长甚至导致细胞死亡,因此,通常需要测试工作才知道对细胞生长的效果。低质量的血清常被病毒、菌体和支原体等微生物传染,导致细胞培养失败,浪费了科研人员的时间和精力。龙港Biochannel培养基胎牛血清起酸碱度缓冲液作用。
胎牛血清应该怎么选?血源可追溯性:选择来源安全、可追溯的FBS对于细胞培养来说至关重要。目前市面上存在较多以假乱真的FBS产品,科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。对此,国际血清行业协会(ISIA)实施了供应链可追溯性的行业标准,以确保FBS的质量和安全性。例如,FBS供应商是否保留原产地的可追溯记录?是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件?这些都是判断FBS可追溯性需要考虑的因素。产品检测,每款FBS在生产上市之前,必须经过严格的质控检测。质控环节必不可少,以确保上市的血清符合规定合乎规格,而血清产品分析证书(COA)就是FBS质控的重要体现。在COA中,常规的检测指标包括内有害元素、总蛋白、细菌、病毒等,例如我国药典规定,FBS中内有害元素含量应≤10EU/mL,另外总蛋白为30-50mg/mL、血红蛋白检测不高于30mg/dL。
胎牛血清(FoetalBovineSerum,简称FBS):是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养,一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎,已接近足月,不能作为胎牛血清的原料来使用。有下列情况者,对血清内有害元素应格外留意筛选:1.养干细胞时,干细胞对内有害元素非常敏感,如果血清中内有害元素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。很多使用者,在血清在试用前,就通过提早审核该批次《检测报告》,以决定是否入围进行试用。2.养免疫细胞时,过高的内有害元素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。3.基因敲除相关的细胞实验,培养的细胞要尽可能保持其原始状态,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里”。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内有害元素(更好≤1EU/ml),对实验至关重要。胎牛血清:母牛怀孕3-8个月时,采用剖腹心脏密闭穿刺取血。
血清和血浆均来自全血,通过离心去除包括红细胞在内的成分。血浆和血清之间的区别在于,凝血蛋白存在于血浆中,但已从血清中去除。血浆一般是通过在离心前向血液中加入抗凝剂来制备的,但不会去除凝血蛋白。通过在离心前使血液凝固或通过普遍/渐进离心来制备血清。因此,与凝血相关的纤维蛋白原和蛋白质不存在于血清中。在人类中,以下22种蛋白质占血清和血浆总蛋白质含量的99%:白蛋白、总IgG、转铁蛋白、纤维蛋白原、总IgA、α-2-巨球蛋白、总IgM、α-1-抗胰蛋白酶、C3补体、结合球蛋白、α-1-酸性糖蛋白、载脂蛋白-B、载脂蛋白-A1、脂蛋白(a)、因子H、铜蓝蛋白、C4补体、补体因子B、前白蛋白、C9补体、C1q补体和C8补体。剩下的1%包括数百种蛋白质。更丰富的血清蛋白白蛋白,浓度为50mg/ml,约占总蛋白质量的一半。胎牛血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物。龙港Biochannel培养基
胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。龙港Biochannel培养基
胎牛血清的生产和质控也是影响产品品质的重要因素。胎牛血清生产流程可分为原料采集、原料加工及冷链运输三个重要环节。生产过程中的每一步,如血源采集、加工、过滤、辐照处理、包装、质检和物流等,都必须遵循行业高标准,以确保产品的优异品质。一个符合业内标准的血清生产流程是这样的:在严格规范的健康与检疫监控下,怀孕母牛从牧场运输到屠宰场,胎牛经心脏穿刺取血,得到胎牛血清原料;新生牛和小牛血清则取自出生相应天数的牛血液。按照国际标准,血清生产需经过多级预过滤和三级0.1μm精过滤,以去除包括支原体在内的各种微生物与杂质。生产后的血清需经过严苛的质检环节,得到合格成品后,保存和运输环节也要严格遵循相关要求。龙港Biochannel培养基
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