胎牛血清作为细胞生长不可缺少的重要营养来源一直备受科研人员重视,那么胎牛血清在参与细胞培养实验都发挥着什么作用呢?胎牛血清,是胎牛血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、元素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量很大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必需的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能:提供维持细胞指数生长的元素、基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。无合格质检的胎牛血清存在支原体、病毒等污染,这对细胞培养的实验结果会造成严重不良影响。DMEM/F12现货
进口的胎牛血清:过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,好的血清应是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较粘稠。1、如发现血清浑浊,不透明,含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性,若棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,有溶血现象。2、总蛋白含量,胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采集血液的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。3、血红蛋白,标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高,反之,数值越低。DMEM/F12现货胎牛血清可以起到缓解酸碱度的作用,目前这方面的作用已经得到了证实。
胎牛血清的保存方法:1、需要长期保存的胎牛血清须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏,而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可将40~45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。3、胎牛血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
胎牛血清使用中的常见问题:如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。胎牛血清对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
为什么使用胎儿血清而不是新生儿血清或成人血清?胎儿血清含有较多的生长因子,丙种球蛋白(即抗体)含量较低,非胎儿血清也有。这些很重要,因为生长因子促进细胞存活和增殖,而抗体可以与培养的细胞结合。此外,与成人或新生儿相比,胎儿血清中的补体蛋白(补体)含量较低。这些补体具有溶解培养细胞和干扰免疫测定的不良作用。血清和血浆均来自全血,通过离心去除包括红细胞在内的成分。血浆和血清之间的区别在于,凝血蛋白存在于血浆中,但已从血清中去除。血浆一般是通过在离心前向血液中加入抗凝剂来制备的,但不会去除凝血蛋白。通过在离心前使血液凝固或通过普遍/渐进离心来制备血清。因此,与凝血相关的纤维蛋白原和蛋白质不存在于血清中。胎牛血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。DMEM/F12现货
胎牛血清蛋白和脂类含量低,表现为稀薄、清淡。DMEM/F12现货
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