苏州微滴式数字PCR简介

数字PCR检测及分析原理在上世纪90年代就被提出来了，但是无奈受限于当时的技术条件，样本稀释及分配都是靠手工来完成的，受到很多因素的干扰和限制；并且结果分析对于研究者来说也十分枯燥与繁琐，因此在很长一段时间dPCR发展停滞不前。后来由于微流控技术与微纳集成制造工艺的发展解决了dPCR过程中的几个关键技术问题，推动了dPCR的研究与商业化的发展。目前根据dPCR样本稀释分配的方式，基本可分为三大类，一种是基于大规模集成微流控芯片；第二种是使用微反应室/孔板；第三种是微滴式。但不论是走芯片式还是微滴式，其基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或者微滴当中，每个反应器的核酸模板数少于1或者等于1。经过PCR扩增之后，有一个核酸分子的模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，可以推算出原始溶液的核酸浓度。单张芯片一次可处理8个样本。苏州微滴式数字PCR简介

数字PCR也叫DigitalPCR（dPCR），是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说，数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值，不受扩增效率的影响，能够直接读出DNA的分子个数，能够对起始样本核酸分子***定量。数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份，然后再将其分配到不同的反应单元中，使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子（即DNA模板），每个单元都会对目标分子进行扩增，然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言，传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中，这也是数字PCR与其比较大的区别。苏州微滴式数字PCR简介MicroDrop™数字PCR可广泛应用于科研、医疗、出入境检验检疫等领域。

相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言，数字PCR具备以下优势:●灵敏度可达到单个核酸分子：检测限低至0.001%，主要系为数字PCR可以实现靶标DNA/RNA的生物浓缩；●无需标准曲线活参照基因进行对比来测定核算量，可对靶分子起始量进行***定量，直 接独处DNA分子的个数；●适合环境复杂样品的检测：终点PCR检测，不依赖Ct值，不依赖扩增效率，能克服PCR***剂的影响，避免样品间的交叉***问题，适合各类复杂环境中的样本进行***定量，如动血样、粪便、尿液、痰液、水样、土壤、植物等；

MicroDrop-100数字PCR系统具有如下优点：1、JUE对定量，结果判读不需要依赖标准曲线；2、突破局限，检测灵敏度可低至万分之一；3、专利设计的具有高精度复杂三维微纳防污染结构的微流控芯片，单张可同时处理1-8个样本；4、一键式自动操作，20uLPCR体系可生成100,000微滴，8个样本单次微滴生成 需2分钟；5、FAM、HEX（VIC）双荧光通道，半导体激光器做为激发光 源相比LED光源，稳定性高，功率稳定不影响检测灵敏度，单色性能优异降低对检测特异性的影响，且方向性好；6、检测器为2个光电倍增管，灵敏度及增益优于MPCC或CCD,普通的硅光子计数器，增益为10^5，光电倍增管增益可以达到10^9；7、 知识产权的软件系统可直接计算拷贝数、拷贝数浓度，CNV值，突变丰度；阈值线可自动或手动完成，每个样本可单独设定阈值线；输出数据图标、直方图、一维图、二维图、浓度图、95%置信度不确定性区间等；软件可自动识别复杂微滴分簇四簇；软件具备数据质控功能，支持阳性微滴数、阴性微滴数、总微滴数统计及这些指标的任意组合；单个样本100,000微滴的反应体系以及高灵敏度的检测系统，配以独特的软件系统，可以实现高达20重的PCR分析；8、单次检测通量96个样本，操作灵活；关于甲基化含量的鉴定。

MicroDrop-100微滴式数字PCR应用范围如下：a.动植物检验检疫，动物源性分析、极微量病原菌检测定量分析、转基因产品检测；b.降低筛查成本、缩短检测周期，适用于T13\T18\T21三体综合征等遗传病的风险评估；适用于zhong瘤早期筛查、分子分型、靶向用药和疗效监测等；适用于传染性疾病的早期诊断和诊疗指导；c.可用于DNA甲基化的检测、CRISPR-Cas9基因编辑效率检测等。d.基因表达差异监测单细胞研究：测序、PCRe.无创产前筛查：低成本、快速、传染性疾病：HBV、HIV、CO VID-19定量样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定。苏州微滴式数字PCR简介

双通道荧光检测，支持EvaGreen染料及探针法。苏州微滴式数字PCR简介

研究方向甲基化含量鉴定作为表观遗传学研究中重要的一个研究方向——甲基化程度分析，现阶段有不同的方法或技术来进行研究：如传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序统计法、抗体检测法、定量PCR检测法等。这些方法皆因方法学的问题而不能获得精确的定量，而微滴式数字PCR系统通过对样品的微滴化处理及目标因子的***拷贝数定量，为甲基化程度的精确定量检测提供了一种全新 的技术。*****的伴随诊断常用体液来源(如血液，胸腹水，唾液及尿液等)的待检标本中的DNA，有正常脱落体细胞和病变脱落细胞两种来源，前者的量远大于后者。通过微液滴处理能在每个微液滴中有效减少正常体细胞DNA的干扰，实现**标记物的有效检测，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突变检测、乳腺*/胃*的HER2基因扩增检测等，应用于**精细医学的伴随诊断。苏州微滴式数字PCR简介

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