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来源: 发布时间:2022年12月16日

qPCR第三方检测方法的分析验证有哪些内容?效率不仅是 PCR 效率,还包含反转录(Reverse transcription,RT)的效率。RT 效率是指 RNA 合成 cDNA 的效率,如果 1,000 个 RNA 分子变成 1,000 个 cDNA 分子,效率就是 100% ,实际上很多 RT 酶的效率对于不同浓度的 RNA 样本存在差异,这样 cDNA 扩增后的结果并不能真实反映样品中 RNA 的水平。PCR 效率是指 DNA 在扩增的每个循环中复制的效率,每个循环增加 2 倍,其效率就是 100% ,这也和所选试剂、引物、模板质量密切相关。梯度稀释实验得到的标准曲线可直观地显示各浓度理论值和测得的 Cq 值的相关性,其中 R2 值表示各个数据点是否正好落在标准曲线上,当 R2 < 0.98 时,表明数据偏差较大。第三方检测基础实验,上瑞普信啊!陕西ELISA第三方检测公司

GSDME全长蛋白在切割前是没有活性的,N端和C端结构域之间的分子内相互作用调控自抑制。caspase-3可以将全长GSDME,剪切成有活性的N端(包含1-270a段的GSDME-N)和C端(GSDME-C)。如果需检测到N端或者C端的GSDME片段,细胞通常需要诱导处理。在检测GSDME全长时需注意,其表达水平因样品类型(组织和细胞)而异,可能在部分组织和细胞株系表达,其表达水平也存在差异,因此需要对样品处理和WB实验进行一些优化。建议设置阳性和阴性对照。并且组织样本成分更复杂,在WB实验时可能出现多条条带现象。陕西ELISA第三方检测公司第三方检测细胞实验就找瑞普信!

“做miRNA下调,QPCR检测miRNA,表达水平无变化”,这到底是怎么回事?现有miRNA抑制手段,无论是基于载体构建的、还是化学合成的,本质上都是用跟成熟体互补的反义miRNA(miRNA海绵体属于不完全互补的反义RNA重复),其可以通过结合miRNA,阻断其与靶基因结合,但并不能有效引发miRNA的降解,原因有两方面:其一是反义RNA与miRNA结合后,序列很短,导致Dicer酶(细胞内降解双链RNA的主角)不能有效结合;其二是miRNA与Ago2以RISC复合物的形式存在,该复合物也会导致Dicer酶无法高效结合。因此,如果以反义RNA技术抑制miRNA功能,QPCR可以做,如果检测出表达水平下降还好,即便未检测到,也不表示抑制无效,正确的做法是直接检测目的基因蛋白水平是否有上调。但若实验者不清楚靶基因的情况下,不检测到miRNA下调,心里是没底的。

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