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影响转染试验的因素：细胞状态变化：（1）转染试剂与细胞不匹配细胞转染较适合的不是原代细胞，也不是传代很多次的细胞。这是因为细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。较适合转染的细胞是经过几次传代后达到对数生长期的细胞，细胞生长旺盛，较容易转染。（2）把握时机没错！转染也有适当的时机，相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前现在种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态，如细胞数量过多，互相叠加，营养物质耗竭，代谢废物积聚，转染率低下也是很正常的！直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。济南正规细胞高效转染试剂服务电话

DNA细胞转染步骤：1.提前现在细胞铺板提前现在将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。注意：①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加物品。济南正规细胞高效转染试剂服务电话蛋白表达和培养基的选择哺乳动物细胞系合成可溶的。

细胞转染，你至少要掌握以下几点：胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越普遍。可分为瞬时转染，稳定转染等。瞬时转染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72h内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。稳定转染是指外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，通常需要一些选择性标记反复筛选得到稳定转染的同源细胞系。

转染效率：线型PEI(LinePEI,LPEI)与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些，过去的研究认为在不考虑具体条件，LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低，有利于细胞定位，因此与BPEI相比应该转染效率高一些。但较近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物，从而提高转染效率，但同时细胞毒性也增大。超很高枝的、较柔性的PEI衍生物含有额外的仲胺基和叔胺基，在染实验中发现这种PEI的毒性低，但转染效率却较高。GenEscort是采用各种分枝状和超很高枝状的小分子PEI与各种含有生理条件下可降解键的交联剂交联，合成出的一系列很高枝的可降解的PEI衍生物。聚合物的分枝结构使得其具有较高的正电性，因此易于高效地包裹各种DNA、RNA分子及质粒形成小的纳米颗粒，从而提高转染效率，当所形成复合物进入细胞以后，其中所含的生理条件下可降解的化学键在细胞内水解，使交联聚合物分解为无细胞毒性的小分子PEI，这样结构的转染试剂在体外应用可以获得高的转染效率和低的细胞毒性，其可降解性对体内应用也具有重要的意义。转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。

转染的注意事项：用于蛋白生产的细胞的转染可以在添加有血清或无血清培养基中进行。但更倾向于使用无血清培养基表达蛋白，因为血清蛋白会干扰下游表达蛋白的纯化。无血清培养基一般针对某一特定细胞类型优化并有几类无血清培养基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培养基低得多）。无蛋白培养基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化学成分的培养基不含有蛋白或未知组成的成分。多种多样的配方使您可以选择较适合您应用的一种。在含血清时转染的细胞可以适应无血清培养基，无蛋白培养基或限定化学成分的培养基。在部分情况下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），对于已适应无血清或无蛋白培养基的细胞，可以使用其培养基进行转染。其他一些无血清培养基包含克制阴离子脂质体介导转染的成分，在这些情况下，有必要在诸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培养基中进行培养和转染在瞬时转染质粒中往往都含有一个报告基。济南正规细胞高效转染试剂服务电话

大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。济南正规细胞高效转染试剂服务电话

细胞转染常用步骤：1.转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2.选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。3.将混合液在室温放置10―15分钟。4.吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。5.加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。6.到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。济南正规细胞高效转染试剂服务电话

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