Fusarium venenatum Nirenberg

制备大肠杆菌感受态细胞的关键是什么？（1）感受态细胞的质量：所用的CaCl2等试剂均需是至高纯度的，并用至纯净的水配制，建议分装保存于4℃。（2）细胞的生长状态和密度建议从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的OD600控制。对TG1菌株，OD600为0、5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。密度过高或不足均会使转化率下降。枯草芽孢杆菌的芽孢位于菌体中心或稍偏。Fusarium venenatum Nirenberg

铜绿假单胞菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基(MAC)；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通全营养型培养基(如TSA、PCA、营养琼脂}或血琼脂培养基、铜绿假单胞菌培养基。普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落，铜绿假单胞菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色；在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽；在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落，365nm紫外灯下显荧光。如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部细菌的生长不良。Fusarium venenatum Nirenberg铜绿假单胞菌有菌体o抗原和鞭毛h抗原。

对于铜绿假单胞菌的检测，前处理直接混匀制成待测样品或者采用滤膜过滤法进行处理。直接混匀测试揭开检测板上层膜，在检测板纸片上加1毫升直接混匀制成的待测样品，迅速贴好上层膜井水平晃动检测板，静置2分钟.滤膜过滤法处理揭开检测板上层膜，在检测板纸片，上加1毫升无菌水湿润后，迅速用无菌镊子将过滤水样的滤膜移放在检测板纸片上(滤膜截留细菌面向上)，滤膜与纸片之间不要夹留着气泡，贴好上层膜。前处理25g(或25毫升)样品放入装有225毫升生理盐水的均质袋中，以8000r/分钟均质1~2分钟，制成1：10样品均液，根据样品污染程度及检验需要，可进一步制成10倍递增的样品稀释液。

关于铜绿假单胞菌的干冰保存法一般为-70摄氏度左右，即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。液氮保存法一般为-196摄氏度，是适用范围较广的铜绿假单胞菌保存法。冷冻干燥保存法的原理是首先将铜绿假单胞菌冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。绿脓假单胞菌(绿脓杆菌)保存操作流程是，菌株复苏按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏，隐球菌除传显色培养基以外，另传1/2块血平皿上述菌株统一37摄氏度孵育48小时。菌种鉴定一般在48h后观察结果。保藏方法是传代培养。大肠杆菌可以发酵葡萄糖产酸、产气。

铜绿假单胞菌为专性需氧菌，生长温度范围25摄氏度~42摄氏度，较适生长温度为25C~30摄氏度，特别是该菌在4摄氏度不生长而在42摄氏度可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素与带荧光的水溶性荧光素等。在血平板上会有透明溶血环。若要长期保存，铜绿假单胞菌在4摄氏度~6摄氏度时易死亡。适于放置于10摄氏度~20摄氏度室温避光保存或者-20摄氏度以下保存。当铜绿假单胞菌放置于2摄氏度~8摄氏度保存时，该菌易死亡。与铜绿假单胞菌相似的菌还有副溶血性弧菌等部分弧菌，在拿到这一类菌株时要注意它们的保存温度，以免保存不当造成损失。金黄色葡萄球在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长，在琼脂平板上形成圆形凸起。Fusarium venenatum Nirenberg

金黄色葡萄球对高温有一定的耐受能力，在80℃以上的高温环境下30min才可以将其彻底杀死。Fusarium venenatum Nirenberg

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌表示，为一种常见的食源性致病微生物。该菌较适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中，空气、污水等环境中也无处不在。金黄色葡萄球菌形态为球形，在培养基中菌落特征表现为圆形，菌落表面光滑，颜色为无色或者金黄色，无扩展生长特点，将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中，在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。Fusarium venenatum Nirenberg

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