湖北推荐的外泌体

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外泌体的生成，微泡是由质膜的出芽形成的，膜双层通过磷脂的不对称分布来维持脂质的“多面性”。外层富含磷脂酰胆碱和鞘磷脂，而内层主要由磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺形成。然而，胞质Ca2+的内流可以破坏这种不对称性，导致磷脂跨膜双层的重新分配，促进膜起泡。依赖Ca2+的蛋白水解同时降解膜相关的细胞骨架，促进出芽过程。在外泌体形成过程中，首先，MVE(多囊体)向内芽形成小泡，内含来自细胞质的货物(蛋白质、mRNA和miRNAs)。然后，MVE要么与细胞膜融合释放外泌体(内囊泡)，要么与溶酶体融合降解MVE含量。到达目的地后，外泌体通过内吞途径或与靶细胞膜融合，将其内容物释放到细胞质中。细胞的膜的囊泡也可以直接从细胞膜上萌发，携带活性蛋白、RNA和其他化合物。湖北推荐的外泌体外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建。

外泌体和微囊泡的区别在于其生成的方式不同。从晚期内体来源产生的细胞外囊泡称为外泌体，从细胞膜直接出芽产生的细胞外囊泡称为微囊泡。二者的大小也有所不同，外泌体的粒子直径在40~100nm范围，微囊泡的粒子直径在100~1,000nm，但有报道发现也存在直径较小的微囊泡，所以无法明确从粒子大小来区分二者。外泌体是健康细胞和*细胞均可释放的小膜泡，***存在于人体的血液、乳汁、尿液以及唾液等多种体液中，其种类和数量与机体的生理状态息息相关。

外泌体提取，PEG-base沉淀法，聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。通过差速超速离心法（Differential Ultracentrifugation）从细胞培养基上清或血浆血清中提取外泌体。外泌体提取，实验经验丰富。

外泌体的提取方法有多种：包括传统的差速离心、密度梯度离心，以及后来发展的超滤法、聚合物沉淀法、免疫分离、隔离筛选法、体积排阻色谱法等。这些方法各有利弊。外泌体经细胞分泌后存在于体液或者血液中，故检测外泌体的样本一般为血液（全血、血浆）、体液（尿液、唾液、脑脊液、羊水、唾液等）、细胞上清液。提取所需要样本量血清：样本量>5ml（全血10ml）。血浆：样本量>5ml（全血10ml）。体液：样本量>20ml。细胞培养上清液：样本量>20ml。南京实验医学平台一站式外泌体检测服务平台。湖北推荐的外泌体

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外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。五是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度比较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法比较新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体湖北推荐的外泌体

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