多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)是一种病因不明的主要累及***系统蛋白质的慢性炎性脱髓鞘疾病。其病理特征是血管周围炎***变,髓鞘破坏,星型细胞增值,少突胶质细胞和轴索缺失。实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephakmyelitis EAE)是目前国际公认的研究MS的动物模型,比较常用的致敏原多为脑或脊髓组织匀浆、髓鞘蛋白成分或其多肽片段等。由于髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)存在于髓鞘和少突胶质细胞的比较外层,具有高度免疫原性,MOG和抗MOG抗体在MS的发病过程中起重要作用,用MOG诱导的EAE可以作为研究MS的理想模型。MBP是用来EAE研究的髓鞘抗原,多以诱发急性EAE(Acute EAE)模型。推荐的eae模型
获取实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠小胶质细胞,并检测其特性。方法取8周龄,雌性C57BL/6小鼠行EAE造模,待至发病高峰期(第15天)时以PBS灌注后取小鼠后脑和脊髓,切碎后加胰酶消化,消化完成后通过100μm滤网滤过,而后采用Percoll密度梯度离心法分离获取单个核细胞,进一步利用CD11b与CD45抗体染色,通过流式细胞仪分选CD11b~+CD45~(high)和CD11b~+CD45~(low)细胞,即分别得到相对活化和静息的小胶质细胞,***对流式分选获取的小胶质细胞行qPCR检测。结果通过形态比较,获得了高纯度的小胶质细胞。FIZZ-1基因行qPCR检测,结果显示在EAE急性期M2型小胶质细胞明显增多,符合文献报道。结论该方法能从EAE小鼠体内分离获取高纯度的小胶质细胞,可用于相关目的基因后续检测。推荐的eae模型通常采用主动诱导法制备EAE模型,将抗原与佐剂的混合乳剂直接注射至动物体内。
EAE模型可以通过用髓磷脂抗原免疫小鼠来触发1. 抗原1 是什么能触发免疫系统产生抗体2 反对。 抗原1 在 EAE 中使用的靶向髓鞘蛋白包括髓鞘碱性蛋白 (MBP)、蛋白脂质蛋白 (PLP) 和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MOG)。 EAE 模型导致动物的大脑和脊髓脱髓鞘。 传统上,研究表明 T 辅助细胞3 是 EAE 的关键组成部分,但尚不清楚 B 细胞的作用在EAE模型。 在eae模型小鼠中,当受到刺激时,往往会*** T 细胞或 B 细胞,但通常不会同时强烈激发两者。该模型在大多数 (59%) 具有 B 细胞的小鼠中触发了 EAE4 和 T 细胞3 那是特定于 MOG 的。
EAE模型的发展与年龄密切相关。幼龄动物发病后症状很快达到高峰,随后又迅速恢复,和成年动物相比病程较短,其抗原注射部位及CNS内的炎性细胞浸润程度较轻,并且幼龄动物体重偏小,一般情况差,易出现麻醉意外而死亡。若动物体重(周龄)偏大,则发病延迟,且症状较重,所以选择受试动物以青年期为佳。但若作为抗原提供者,其年龄可适当放宽,一般大于4周即可。MS多为青年女性,EAE的发生也存在性别差异。一般来讲,雌性动物较雄性敏感,表现在雌性动物的发病率高,临床症状相对严重,如Wistar大鼠及SJL/J小鼠,但也有的动物如Lewis大鼠,雄性较雌性敏感。另外实验时间选择在夏季比冬春季节诱导动物模型的敏感性更高。敏感性高的动物,有时症状较严重且死亡率高,应引起注意。小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬、猴等均可成功诱发EAE,在选择动物时需要寻找EAE模型的敏感动物。
自噬在EAE模型中的研究鲜有报道,本实验提出在EAE早期,即存在着自噬水平的降低,并贯穿疾病全程。进一步抑制自噬水平,可以促使疾病早期小胶质细胞***,增高病程中IL-1β的表达水平及炎细胞浸润情况,加重神经功能缺损,所以EAE自噬水平的降低是导致疾病炎症反应发***展的可能原因。这为***MS提供了新的临床思路和***策略。但本实验尚不能明确自噬降低的原因,有待进一步的研究。HE染色结果显示免疫后16 d及30 d EAE+3-MA组小鼠炎细胞浸润情况较同时间点EAE模型组加重EAE通常用作细胞介导的特异性的自身免疫疾病的模型。推荐的eae模型
eae模型是实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的缩写。推荐的eae模型
比较不同的神经功能损伤评分标准对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)运动功能障碍评估的效能。方法:应用MOG35-55多肽加完全福氏佐剂乳化后免疫20只C57BL/6小鼠,复制EAE小鼠模型,并使用3种不同的评分标准(Kono's5分法、Hooper's7分法、Weaver's15分法)观察和评估实验动物的发病情况,对实验小鼠在发病初期、高峰期的神经功能障碍进行定量的功能损伤评价。结果:3种评分标准比较,在发病初期,15分法和7分法评估神经损伤症状的敏感性相当,比5分法高;高峰期,以症状评分与病理评分的相关性程度来比较3种评分法的效度,15分法效度比较高,7分法次之。结论:Weaver's15分法评价EAE模型神经功能损伤症状,具有明显的优势,推荐作为今后EAE研究的优先评分法。推荐的eae模型