在我们食品微生物检测过程中,除了我们知道要检测的目标微生物之外,往往会出现一些和目标微生物表现不一,但你又想知道它是什么菌属的情况,特别是对于一些生产企业,有时候往往会怀疑是否是因为这个“非目标菌”的存在,从而影响到了产品质量。那怎么去鉴定那些“非目标”微生物呢?又有哪些方法和手段可以采用呢?传统的细菌系统分类,也就是常说的鉴定,通常是通过纯培养分离后从形态学、生理生化反应特征以及免疫学特性(血清学分析)进行鉴定。这也是我们目前国标中常用的鉴定手段,这种方法的优点就是所用试剂简单易得,常规实验室即可展开,经济实用,缺点呢,就是鉴定所需时间较长,且容易判断不准确。用这种方法,要先进行革兰氏染色,从镜检分析其可能的微生物种属,再根据判断结果,按照《伯杰氏手册》上的生化项目进行实验,确定其可能的微生物种属。比如,镜检是革兰氏阳性杆菌,且周围或菌体顶端有芽孢产生,这时候我们就要往芽孢杆菌的方向去进行生理生化鉴定。
传统的微生物检测方法:直接显微镜观察。成都未知病原鉴定诊断
微生物鉴定的用途:医疗保健:准确、快速地鉴定细菌和寄生虫,以进行正确和及时的疾病诊断,并进行适当的诊疗。流行病学:为了追踪病原体和追踪疾病的传播和暴发,以及鉴定新的隔离物,例如耐药隔离。制药工业:由于微生物是对无菌性的重大威胁,对环境微生物的准确鉴定通常是制药行业良好的生产实践(GMP)要求。其他用途:包括刑事调查、微生物取证和环境研究等。传统的微生物鉴定方法依赖于表型鉴定,主要是用染色法、培养法和简单的生化检验。宏观特征包括微生物的整体外观,其形状、大小、颜色和气味等,可以用肉眼看到。通过在琼脂培养基检查其形态学/宏观特征来确定微生物的类型。同一物种在不同的培养基中会出现不同的表现。
成都未知病原鉴定诊断微生物检测中含有一种以上的微生物培养物可以称为混和培养物。
随着100多年来人们对病毒认识不断深入,以及生物技术的发展,人类积累了多种病毒性疾病的鉴别诊断能力,掌握了部分病毒的致病机制及流行规律,研制出一些病毒的特异性疫苗,并设计生产了各种抗病毒化学制品,极大地降低了病毒性疾病的危害性。病原微生物检测方法-高通量测序技术之检验检疫中的应用作为近些年出现的新技术,高通量测序技术经过不断地发展,已经在生物技术、食品安全和医药卫生等各个领域得到应用。在检验检疫领域中,高通量测序技术也正在得到越来越多的应用。高通量测序在降低单碱基成本的同时,测序的准确率更高,这无疑会提高基于DNA序列的分子鉴定的准确率。同时,深度测序让复杂样品中非常低丰度成员的检测成为可能,这种检测低丰度种群的能力会深刻影响复合样品中病原微生物的检出率。
微生物检测中含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物,如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞,那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。在进行菌种鉴定时,所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化,方法有许多种。先把微生物悬液通过一系列稀释,取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50℃左右的营养琼脂培养基充分混合,然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中,待凝固之后,把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落,取单个菌落制成悬液,重复上述步骤数次,便可得到纯培养物。由于各种微生物所具有的酶系统不完全相同,对许多物质的分解能力亦不一致。
微生物鉴定系统:微生物鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生化反应鉴定细菌的基础,而试验结果的准确度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、培养物浓度、孵育条件和结果判定等。大多微生物鉴定系统采用细菌分解底物后反应液中pH的变化,色原性或荧光原性底物的酶解,测定挥发或不挥发酸,或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌。药敏试验分析系统的基本原理是将微量稀释在条孔或条板中,加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育,通过测定细菌生长的浊度,或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解,观察细菌的生长情况。在含有培养基中,浊度的增加。临床细菌学不可缺少的基本技术,是获得纯培养物的必要手段。成都未知病原鉴定诊断
高通量测序技术对核酸进行测序是非特异的。成都未知病原鉴定诊断
微生物鉴定的方法:1.从观察显微镜下甚至光镜下的微生物的的那个细胞的形态,比如说,是球菌,还是杆菌,还是弧菌,还是螺旋菌,这都是可以从微生物的单个细胞形态上区分的。还有就是细胞的形态,比如说是否有鞭毛、芽孢之类的东西,都是微生物鉴别的特征性特征。2.就是观察细菌的菌落形态,因为细菌生长繁殖到一定阶段大多都是以菌群的形态存在的,不同的细菌菌落在不同的培养基上的生长情况不同,部分细菌对培养基要求较高,部分培养基只能在特定的培养基上生存,通过微生物对不同类型培养基的适应性,可以起到对菌种的有效区分。成都未知病原鉴定诊断
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