北京皮肤微生物多样性测序分析服务

随着测序技术的发展，对微生物群（微生物组）的研究逐渐加深，研究热点越来越多集中于环境和生物体相互作用的微生物群。加之测序成本降低，分析技术不断提升，都使得宏基因组测序技术得到普遍应用。为什么要做宏基因组：宏基因组相对16S来说其物种分辨率会更高，随着物种测序完成越来越多，数据库更加完善，在肠道菌群方面基本能实现97%以上的菌都能鉴定到种，90%以上到菌株层面。而且可以同时获得除RNA病毒外的所有物种的分布。此外包括菌基因组CNV等方法的出现，可以直接通过大规模宏基因组测序不只找到可能的菌，进一步还能鉴定出特定候选基因区段。宏基因组测序以特定环境中的整个微生物群落作为研究的对象,不需对微生物进行分离培养。北京皮肤微生物多样性测序分析服务

宏基因组测序的挑战：背景干扰，病原样本深藏在大量宿主和其它微生物之内，临床病原常为起始量低，背景噪音大的复杂样本，大量宿主信号掩盖了微量病原信号，致使敏感性偏低，难以有效区分。另外，因为RNA病毒需先转化为互补DNA(cDNA)再进行测序，因此病原宏基因组测序技术对RNA病原体检出率比DNA病毒更低。可以考虑对核酸样本进行特殊的处理，对病毒序列进行特异性富集，再进行建库测序。质量控制：病原宏基因组测序技术涉及一系列繁琐的实验操作过程，例如文库构建涉及到基因组打断，测序接头链接，全基因组扩增等多个步骤，每一步骤的目标是要每个分子都以相同的效率执行每个步骤，打断有损失，连接有差别，扩增有偏好，都会带来检测误差。北京皮肤微生物多样性测序分析服务病原微生物二代测序也称宏基因组测序（mNGS）是目前临床上针对病原常用的基因测序方法。

在传统的诊断检测中对病原体的诊断检测是通过体外培养的方式进行，但是不同微生物的培养条件不一样；不同的微生物的培养技术要求也不一样；同时，体外培养受时间、空间和培养技术人员的限制。宏基因组分析技术是一种的病源体诊断检测技术，可以在不通过任何培养过程的条件下，通过基因序列的比对，发现和鉴别罕见病源体引起的疾病，从而针对性地使用药物，使病源微生物传染所形成的疾病的准确、高效。元基因组（宏基因组）学研究不要求对每个微生物进行分离、纯化和培养，而是直接从样品中提取基因组DNA后进行测序分析。通过元基因组测序，能够揭示微生物群落多样性、种群结构、进化关系、功能活性及环境之间的相互协作关系，极大地扩展了微生物学的研究范围。

探普生物进行病毒宏基因组测序，样品具备什么条件才能获得比较质量的宏基因组分析效果？其他公司对用于测序的样本的要求较高。而在探普生物进行病毒宏基因组测序，基于探普的专有流程，样本要求非常低，不要求总量到达微克，探普有专门的收样标准和送样流程。为了保证后续数据的有效利用率，需要客户配合完成合格的取样步骤和样本前处理步骤。当然探普也提供适当的样本处理服务。核酸性质有RNA和DNA之分，核酸链还有单双链之分，而核酸本质不同和单双链的不同，进行同样的实验步骤其效率也不一样。这些特点决定了宏基因组测序是相对个性化定制化的一类服务，出于对结果真实性的尊重和保证，需要客户和销售人员充分沟通，设定合理的样本处理方案。宏基因组测序能够检测出新发和罕见病原体。

目前技术的进一步成熟，未来二代测序病原体检测应进一步在成本下降、诊断标准完善、质量控制提升等方面进行完善。同时应进一步增加大样本量的研究，以建立中国传染病原体宏基因组学检测的标准规范。对于怀疑神经系统急性传染的患者，如有条件，推荐在抽取脑脊液时同步留取2mL脑脊液标本保存于-16～20℃冰箱。在完成常规生物化学检查和培养之后，若3d内未获得明确的病原学依据且经验性抗传染无效，推荐对留存的脑脊液标本进行二代测序检测。若未留存标本，可重新采集标本（Ａ，Ⅱ）。微生物鉴定可以用微生物对噬菌体的敏感性作为指标来鉴定微生物的种属。北京皮肤微生物多样性测序分析服务

微生物鉴定的用途：医疗保健：准确、快速地鉴定细菌和寄生虫，来进行正确和及时的疾病诊断。北京皮肤微生物多样性测序分析服务

目前构建的病毒宏基因组学文库主要有载体克隆文库和基于高通量测序技术的加接头的文库。随着深度测序技术的不断发展，第二代高通量测序技术、第三代单分子测序技术已经普遍地应用于各项研究领域中，以454测序技术和Illumina测序技术为表示的二代测序法得到迅速推广用于构建病毒宏基因组文库，相信将来第三代测序平台如tSMSTM（truesinglemolecularsequeneing）技术平台、SMRT（singlemoleculereal-time）技术平台、FRET测序技术及纳米孔单分子技术为表示的第三代测序法也将应用于构建病毒宏基因组文库。Donaldson等[23]采用高通量测序技术构建了蝙蝠肠道的病毒宏基因组学文库，获得了600000条读长（Reads）的核酸序列。北京皮肤微生物多样性测序分析服务