一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体(*抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒)。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、***、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。二、免疫组织化学染色方法1、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶。使用北欧免疫组化质控中心NordiQC推荐的IHC抗体组合。贵州提供dMMR抗体检测试剂
1微卫星（microsatellites）不稳定性微卫星（microsatellites）又称简单重复序列，是存在于基因组中的一些小片段核苷酸的重复序列，重复单位一般由1~6个核苷酸组成，重复次数不超过60次，具有高突变性。DNA在复制过程中，尤其是微卫星，可能会出现碱基错配等错误，这些错误累积起来并一代代的传递下去，**终会产生基因突变进而导致细胞ai变。这种在DNA复制过程中产生的一些简单重复序列的插入或缺失，被称为微卫星不稳定性（microsatelliteinstability，MSI）[1]。2MSI与错配修复（MMR）蛋白间的关系DNA错配修复（Mismathrepair,MMR）系统由一系列特异性修复DNA碱基错配的酶分子(MMR蛋白）组成。MMR蛋白的主要功能是修复DNA复制过程中产生的错配，包括单碱基错配和2个以上的插入/缺失错配，从而保持遗传物质的完整性和稳定性，避免遗传物质发生突变。据目前报道：涉及人类DNA错配修复的MMR蛋白主要有5个，其编码基因分别为MLH1、PMS1、PMS2、MSH2和MSH6。MMR系统会对在DNA复制过程中的碱基错配等错误进行纠正，一旦修复系统失效，基因突变的风险便会提高。因此，MMR基因突变后，DNA复制时的过程中便会发生MSI[2,3]。3MSI判定标准MSI的检测方法很多。贵州提供dMMR抗体检测试剂迈杰转化医学为全球合作伙伴提供包括生物标记物挖掘、药物靶点验证、伴随诊断开发等一体化解决方案。
这种类型占Lynch综合征的绝大多数，以MLH1、MSH2、MSH6和PMS2胚系突变为主，突变率分别为32％、38％、14％和15％，携带后两者与前两者相比ai症发生率低、发病年龄较大。(2)上皮细胞黏附分子(EpCAM，又称liu相关钙离子转导信号1)基因杂合性胚系缺失。近年的研究发现，MSH2表达丢失的Lynch综合征患者中，约5％是因位于MSH2上游的EpCAM基因3’端外显子胚系缺失而引起的MSH2表观遗传学沉默，EpCAM胚系缺失的携带者发生结直肠ai的危险性与MSH2突变携带者相似，高于MSH6突变携带者。(3)MLH1基因启动子胚系甲基化。有报道少数Lynch综合征家系的MLH1基因本身并未发生突变，而是因MLH1的启动子发生胚系甲基化而导致的MLH1表观沉默，但携带此类突变的家系的外显率尚待明确。与Lynch综合征不同的是，多数散发性MSI-H结直肠ai并不是由错配修复基因体细胞突变导致的，而是因MLH1基因启动子甲基化导致MLH1基因发生表观遗传学沉默所致。当2个等位基因的MLH1启动子区CpG岛均发生甲基化时，MLH1基因失活，蛋白失表达，由此导致错配修复功能异常所发生的liu与Lynch综合征相关结直肠ai相似，均为MSI-Hliu。近期一项大宗的文献荟萃分析结果显示。
结直肠ai是常见的消化道恶性liu，在我国，特别是在现代化发展迅速的大都市里，结直肠ai发病率的上升趋势更为明显。染色体不稳定(chromosomalinstability，CIN)途径和微卫星不稳定(microsatelliteinstability，MSI)途径是结直肠ai发生的两条主要分子途径。前者占散发性结直肠ai的75％，绝大多数存在APC基因的突变和染色体18q的缺失，并有较高比例的KRAS和p53基因突变，好发于左半结肠，组织学类型以高、中分化为主。后者占散发性结直肠ai的15％，多见于右半结肠，组织学类型以黏液腺ai和低分化腺ai为常见，而且几乎所有的Lynch综合征相关性结直肠ai均通过MSI途径发生。更为重要的是，MSI结直肠ai不*在好发部位、常见组织形态上与CIN结直肠ai存在差异，而且在临床预后、***、遗传性liu筛查方案的选择上也有所不同，因此必须在临床工作中将其区分开来。本文主要就MSI结直肠ai、Lynch综合征的病理特点、发生机制、筛查策略及其临床意义做一论述。一、DNA错配修复(mismatchrepair)系统与MSI结直肠ai错配修复系统的功能是纠正DNA复制过程出现的错误，确保复制过程的“保真性”。错配修复蛋白包括MutS和MutL两大家族，前者包括MSH2／MSH3和MSH6等，后者包括MLH1、MLH3、PMS1和PMS2。【迈杰转化医学】一直以来致力于转化医学服务和伴随诊断产品开发及商业化。
MSI和dMMR检测的临床应用
•实体瘤免疫(PD-1和CTLA-4)患者的选择
•2017年5月23日，美国FDA批准了默克公司的Keytruda（pembrolizumab）应用于高度微卫星不稳定性（MSI-H）或错配修复缺陷（dMMR）的实体liu患者
•2017年8月1日，FDA批准百时美施贵宝的Opdivo（nivolumab）可应用于***氟嘧啶，奥沙利铂和伊立替康***后疾病进展的MSI-H或dMMR的转移性结直肠liu患者
•MSI和dMMR的传统临床应用
•用于结直肠liu和子宫内膜liu患者林奇综合征（HNPCC）的筛查（98%美国临床实验室）
•用于结直肠liu患者的预后指标，MSI-H患者预后较好（美国临床实验室占48%）
•作为结直肠liu患者辅助化疗(5-FU和Irinotecan)的用药指导 迈杰转化医学拥有丰富的伴随诊断开发经验，高质量的管理体系和高素质的研发团队。贵州提供dMMR抗体检测试剂
MLH1抗体试剂 苏苏械备20180519号.贵州提供dMMR抗体检测试剂
在临床中，对于Ⅱ期结肠ai病人，考虑使用5-Fu单药化疗时，主要考虑因素是什么？可能有的医生会说，「Soeasy！检测下MMR啊，看看是dMMR还是pMMR」。来吧，我们看1个病例患者女，51岁，诊断为T3N0M0（伴有普危因素），免疫组化结果：HER2(1+)，GPC3(-)，MSH2(+)，MSH6(+)，PMS2(+)，MLH1(+)，CK19(-)，CK20(+)，Ki67(60%+)。这名患者该不该用单药5-Fu进行辅助化疗？一拿到免疫组化结果，很多医生的表情是这样的：大家都知道，MSI-H/dMMR患者不能从单药5-Fu的***中获益。但问题是，面对由英文字母、数字、括号和加减号组成的免疫组化结果，如何确定是dMMR还是pMMR？到底怎样算H-MSI，怎样算L-MSI，怎样又算MS-S？下面我们就来解决这个问题。MMR基因是DNA错配修复基因，它的表达缺失可引起DNA复制过程中错配的累积，导致微卫星不稳定（MSI）的发生，约15%的结直肠ai是经由MSI途径引发的。dMMR是MMR表达缺失，pMMR是MMR表达正常。dMMR表现为高频度微卫星不稳定（MSI-H），pMMR表现为低频度微卫星不稳定（MSI-L）或微卫星稳定（MS-S）。目前，**常用的筛查结直肠aiMMR表达有无缺失的方法有2种：免疫组化检测MMR相关蛋白的表达，以及PCR检测多个微卫星位点以判断有否存在MSI。贵州提供dMMR抗体检测试剂
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