3、主要平台提供方ABI公司三、二代测序简介1、Roche454测序:454测序是大规模平行测序的开始。2003年底，454公司推出了基于焦磷酸测序法的超高通量基因组测序系统—(GS)。2005年454公司被罗氏诊断公司收购，之后优化推出GenomeSequencerFLXSystem(GSFLX)。罗森博格博士是该技术的创始人,也是IonTorrent平台的创始人。454平台的突出优势是长读长(400nt)，但准确率低，成本高。是高通量测序的过渡。454测序技术的具体步骤为：（1）构建测序文库。将基因组DNA打碎成300～800个碱基片段后，在两端加上锚定接头；（2）PCR扩增。扩增产生成千上万个拷贝；（3）焦磷酸测序。复制过程中如果发生碱基互补配对，就会释放1个焦磷酸，在一系列酶的催化下，释放出荧光信号，会被CCD捕获到。每个碱基反应都会捕获到1个荧光信号，由此一一对应，模板的碱基序列由此获得。作者：心平气和链接：源：知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。 迈杰转化医学开发的伴随诊断试剂盒,基因突变检测试剂盒,检测范围全。安徽抗体全迈杰转化医学NGS平台经验丰富
第二代测序技术高通量测序技术(High-throughputsequencing,HTS)是对传统Sanger测序技术**性的变革，可以一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定，因此也称其为下一代测序技术(NextGenerationSequencing,NGS)，高通量测序技术的出现使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能。技术平台经过科研人员的不断开发和改进，目前成熟的第二代测序技术共有3种，分别为Roche公司的454技术、ABI公司的SOLiD技术和Illumina公司的Solexa技术。Roche/454该技术由JonathanRothberg于2005年发明，该技术是***个被发明的二代测序技术，该技术**生命科学的研究进入高通量测序时代。该技术的基本原理是：一个片段=一个磁珠=一条读长，DN**段无需进行荧光标记，无需电泳，边合成变测序，碱基在加入到序列中时，会脱掉一个焦磷酸，通过检测焦磷酸识别碱基，因此也被称为焦磷酸测序。 安徽抗体全迈杰转化医学NGS平台经验丰富迈杰转化医学同时拥有符合GMP和ISO 13485的要求的GMP生产车间及仓储，可以充分满足客户的需求。
二代测序是一个强大的功能平台，它可以同时给数以万计的DNA分子进行测序。由于这种可以多个样本同时测序的能力，在个性化医疗、遗传疾病和临床诊断等方面，二代测序也就是高通量测序开创了**性的领域。早在1900年代就发明的Sanger测序法，成为了DNA测序的黄金法则，即便到了***它仍被***用来进行常规测序和NGS数据的验证。它利用高保真DNA聚合酶生成与单链DNA模版互补的拷贝。在每个反应中，一个可以特异性识别模版的单链引物，可以从3端开始启动DNA合成，根据碱基互补配对原则，脱氧核糖核苷酸或简单的核苷酸是一个接一个的与模版配对。每个反应还包含四种双脱氧核糖核苷酸的混合物，每一种对应一个DNA碱基。这些双脱氧核糖核苷酸与DNA单体十分类似，因此可以参与DNA链的增长，但是他们和天然的脱氧核糖核苷酸有两点不同：（1）他们缺少一个会影响DNA链进一步衍生的3’羟基。在DNA延伸过程中，这个3’羟基一旦加入DNA分子中就会导致链的终止；（2）每个双脱氧核糖核苷酸都有独特的荧光染料吸附，使得DNA测序的自动检测得以进行。
上述任一所述复合扩增体系还可包括进行pcr扩增反应所需的试剂。所述“进行pcr扩增反应所需的试剂”不包括pcr扩增反应所需的引物。上述任一所述复合扩增体系可为20μl，由10μl2×mastermix、上述任一所述引物组合和模板组成。2×mastermix具体可为德国qiagen公司的产品。所述模板具体可为浓度为1ng/μl的标准品2800m的水溶液或样品的基因组dna。所述样品可为人口腔拭子。所述标准品2800m具体可为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述复合扩增体系或上述任一所述试剂盒的制备方法；该制备方法包括将上述任一所述引物组合中的各条引物单独包装的步骤。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：。迈杰转化医学具有多年伴随诊断服务经验,获得CNAS国际实验室认可,美国CAP认证。
2、IlluminaSolexa测序方法：由Solexa公司开发，2006年发布，于2007年被Illumina收购，并将测序仪命名商品化为IlluminaGenomeAnalyzer（简称GA）；Illumina不断升级GA，特别是HiSeq系列测序仪的研发完成，由此打破了***的“摩尔定律”。基本流程：（1）构建测序文库。提取基因组DNA，随机打断成100-200bp片段，末端加上接头；（2）桥式扩增。解链后的单链DN**段两端被分别固定于芯片上，形成桥状结构，进行桥式PCR扩增。经过PCR扩增，产生数百万条待测的DN**段，随后被线性化；（3）测序。将荧光标记的dNTP、聚合酶、引物加入到测序通道启动测序循环。DNA合成时，伴随着碱基的加入会有焦磷酸被释放，从而发出荧光，不同碱基用不同荧光标记，读取到核苷酸发出的荧光后，将3羟基末端切割，随后加入第2个核苷酸，重复***个核苷酸的步骤，直到模板序列全部被合成双链DNA。Illumina现有二代测序平台：MiSeq、HiSeq2500(1000G)、HiSeq3000、HiSeq4000、NextSeq500、HiSeqX10(10台HiSeq2500并行)、HiSeqXFive。 【迈杰转化医学】开发的dMMR抗体检测试剂,检测费用低,技术成熟,临床易开展。安徽抗体全迈杰转化医学NGS平台经验丰富
迈杰转化医学为生物标志物研究和伴随诊断开发提供科学支持，多层面助力新药研发临床试验。安徽抗体全迈杰转化医学NGS平台经验丰富
染色体STR不属于测序技术的，它是一类分子检测技术，例如Y染色体-STR，一般通过PCR、电泳凝胶结合来分析这段串联重复序列的存在或者多态性，常用来检测性别或亲子鉴定，而不能测出具体的DNA序列信息。测序技术是一代测序（sanger测序）、二代测序（高通量测序）、三代测序（单分子测序）为基础的。二代测序的缺点主要是由其PCR边复制边读取的原理决定的，测序时间长，读长短，末端质量差。三代测序中PacBio实际上就是针对这些缺点的升级，通过巧妙的微孔设计实现单分子读取，而且可以屏蔽游离dNTP的信号，不用每读取一次就要清洗—添加一次dNTP，所以读长比较长，测序速度快。 安徽抗体全迈杰转化医学NGS平台经验丰富